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超氧化物歧化酶SOD活性的测定方法

时间:2021-08-27 13:25:22 来源:学生联盟网

超氧化物歧化酶( SOD )活性的测定方法一、试剂1.0.1mol/L HCl2.10mmol/L HCl3.0.1mol/L Tris标准溶液12.114仃羟甲基氨基甲烷溶于蒸储水,并定容至 1000mL4.50mmol/LTris 缓冲溶液50ml0.1mol/L Tris 标准溶液中加入 0.1mol/L HCl 19.9 22.0ml,定容至100ml,PH 为 8.20。5.30mmol/L 邻 苯 三 酚盐 酸溶液 3.7833g 邻苯 三酚 溶于 10mmol/LHCl 中 ,并 用 10mmol/LHCl 定容至 1000ml.二、仪器1.紫外分光光度计2.酸度计3.恒温水浴锅三、操作方法1.邻苯三酚自氧化速率测定在试管中加入4.5ml 50mmol/LTris缓冲溶液,于25c保温20min力口入1020ul 30mmol/L邻苯三酚,立即计时并摇匀,倾于比色杯内,于 325nm下,每隔1min测吸光值一次,空白以 10mmol/L HCl 代替邻苯三酚,要求自氧化速率控制在0.070 OD/min 左右。2.SOD活性测定将样液加入到Tris缓冲溶液中,其余步骤同自氧化速率测定方法。活力单位定义将一定条件下使每毫升反应液自氧化速率抑制50的酶量定义为一个单位(u)。