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分子技术模板试卷

时间:2021-11-28 13:40:05 来源:学生联盟网

.博士班分子生物学实验技术课模拟试卷1、你想采用PCR技术扩增pEGFP-N1中绿荧光蛋白(GFP)的序列,通过基因A中的BamH1位点将GFP序列插入基因A的编码序列中,并保证全长融合蛋白的表达。请根据下列信息设计用于扩增GFP的引物。

  A B ..GCCAGTGGGATCCTGATTGCC..Ala Ser Gly Ilu Arg Ilu Ala GGATCC为BamH1位点2、你在做一个DNA连接反应。经酶切回收的质粒载体大小为5055 bp、150稀释后测OD2600.2;插入DNA片段大小为675 bp、140稀释后测OD2600.1。请按载体DNA与插入DNA片段克分子数比为13和载体DNA总量约0.15 x 10-12 mole计算,完成下列工作表(每个核苷酸残基的平均分子量以330计)10 x BufferVector DNAInsert DNAH2OT4 ligaseTotal Volume2 ml ml ml ml1 ml20 ml3、下图是一个质粒图谱,标明其主要构件和作用。并根据构建特征,指出该载体的类型和功能特征。提示pIRES-EGFP contains the internal ribosome entry site IRES of the encephalomyocarditis virus ECMV between the MCS and the EGFP enhanced green fluorescent protein coding region.This permits both the gene of interest cloned into the MCS and the EGFP gene to be translated from a single bicistronic mRNA.4、你从大鼠脑组织中克隆了一个新基因,并已知是一种膜蛋白,根据cDNA序列得知氨基酸残基为882个,同时你已制备了特异性单克隆抗体。下图分别是针对原核细胞表达产物、真核细胞表达产物和大鼠组织样本的免疫印迹结果1、原核细胞表达产物2、原核细胞对照3、真核细胞表达产物4、真核细胞对照5、大鼠脑皮层组织6、大鼠心脏组织请解释结果,并设计实验来验证你的判断。5、SARS病毒全基因组测序和相关蛋白的鉴定已完成。你想利用pETBlue-2载体表达SARS棘蛋白(surface spike glycoprotein)作进一步研究。你已有SARS病毒RNA、原核表达载体pETBlue-2、其他相关试剂和实验设备;并知道以下相关信息如下SARS棘蛋白的编码序列(下列为SARS基因组部分序列,棘蛋白序列从21492到25259 bp)21421 gtaggcttat cattagagaa aacaacagag ttgtggtttc aagtgatatt cttgttaaca21481 actaaacgaa catgtttatt ttcttattat ttcttactct cactagtggt agtgaccttg 21541 accggtgcac cacttttgat gatgttcaag ctcctaatta cactcaacat acttcatcta 21601 tgaggggggt ttactatcct gatgaaattt ttagatcaga cactctttat ttaactcagg 21661 atttatttct tccattttat tctaatgtta cagggtttca tactattaat catacgtttg 21721 gcaaccctgt catacctttt aaggatggta tttattttgc tgccacagag aaatcaaatg 21781 ttgtccgtgg ttgggttttt ggttctacca tgaacaacaa gtcacagtcg gtgattatta 21841 ttaacaattc tactaatgtt gttatacgag catgtaactt tgaattgtgt gacaaccctt 21901 tctttgctgt ttctaaaccc atgggtacac agacacatac tatgatattc gataatgcat 21961 ttaattgcac tttcgagtac atatctgatg ccttttcgct tgatgtttca gaaaagtcag 22021 gtaattttaa acacttacga gagtttgtgt ttaaaaataa agatgggttt ctctatgttt 22081 ataagggcta tcaacctata gatgtagttc gtgatctacc ttctggtttt aacactttga 22141 aacctatttt 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bp之间不存在BamHI、EcoRI、SmaI、XhoI位点。请根据以上条件和信息请完成A引物设计(提示要在引物中引入酶切位点作克隆用;下游引物的设计要考虑能连续表达出C端的His6-Tag短肽,即要注意阅读框。)上游引物序列为5-下游引物序列为5-B列出克隆、表达并纯化该蛋白的主要实验步骤a.主要克隆步骤(提示SARS病毒为单链RNA()病毒)b.主要表达和鉴定步骤(提示pET系统的特征是什么)c.主要纯化步骤(提示His6-Tag如何利用)6、在有关蛋白组学的研究中,明确发现某一蛋白高表达,经分析得到部分氨基酸序列如下YLIKLLALGDSGVGKTTFLYRY。请回答a 如何查清它是不是一个已克隆的基因b 若不是,如何获得其cDNA克隆请根据带下划线的5个氨基酸设计出系列寡核苷酸探针。下列遗传密码图供参考。7、下图示为FHIT基因在肝细胞和肝癌细胞株中的表达结果,图A为Northern blot结果,图B为RT-PCR结果。1 从图中可以得到什么信息2 Beta-Actin在本实验中起什么作用3 Northern Blot的原理是什么Northern blot和RT-PCR在进行RNA定量检测时各有何优缺点。

  8、简述应用Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列分析的基本原理,并将下列DNA测序胶片的结果,从53写出合成链的DNA序列。A G T C;.