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凋落物PLFA取样和处理方法

时间:2021-11-28 13:40:44 来源:学生联盟网

.凋落物和土壤前处理取样每个次小区分别取1袋米老排凋落物和1袋杉木凋落物,每个网袋单独装入一个塑料袋;同时用土钻取网袋下面0-10cm土壤装入自封袋。共36个网袋36个土样。网袋和土壤放在装有冰块的冰盒带回实验室。凋落物前处理1,混合凋落物带回实验室后,用剪刀剪碎混合,分成三份,一份-20冷藏做PLFA,一份4保鲜做凋落物酶,另一份烘干称重计算分解速率。2,脱水把-20冷藏的凋落物放入冷冻干燥机脱水(-80),24小时左右3,粉碎 脱水之后的凋落物用球磨机粉碎,装入自封袋,封好袋口,-20冷冻。4,运输把凋落物和土壤样品装入放有冰块的大冰盒带到广州。5,实验时每个样品用量为0.1g(华南植物园),其他程序与土壤PLFA一样。土壤前处理带回实验室的土壤人工挑拣出石子,细根等,然后混合放在-20冷冻带到广州。具体实验步骤1、凋落物样品用球磨机粉碎(10 m)2、称取冷冻干燥后的凋落物样品(2501 mg)于玻璃离心管中(25 ml),用磷酸钾溶液(50 mmol l-1,pH 7.4)1.6 ml 、甲醇4 ml、氯仿 2 ml;3、涡旋30s,超声2 min,在37下温育30min,然后离心(800g),将上层清液倒入50 ml分液漏斗中。然后再重复浸提一次,合并两次上层清液。4、向分液漏斗中再加入4 ml氯仿,4 ml水,然后轻轻的摇匀,放置整晚。第二天5、收集分液漏斗中的下层清液(氯仿相),在氮气下吹干。6、通过色谱硅胶小柱进行脂质分离用氯仿(32 ml)洗脱中性脂质,用丙酮(32 ml)洗脱糖脂,这些全部丢弃。最后用甲醇(32 ml)洗脱极性脂类,收集到玻璃试管中。在氮气下吹干。7、在剩余残留物中,加入2ml氢氧化钾(KOH),1 ml甲苯甲醇(11,v/v),然后在37下温育30 min。参考文献Prior to analysis,frozen samples were ground with a Wiley Mill to pass through a 40-mesh screen.FromTemporal dynamics of microbial communities on decomposing leaf litter of 10 plant species in relation to decomposition rate SBBSubsamples for PLFA and enzyme assays were frozen -20C until analysis.From SARAH E.HOBBIELFAs were extracted from 0.5 g freeze-dried residuesPetra Marschner; SBB;.